產品名稱：Fast Pfu DNA Polymerase
中文名稱：快速Pfu DNA聚合酶

產品編號與包裝規格：

產品描述：本制品是通過采用分子進化技術對普通Pfu梅進行改造而獲得的 新型Fast Pfu梅，是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶解決了高保真PCR反應中Pfu梅擴增靈敏度低、延伸速度緩慢的難題，能夠高效、快速擴增≤6kb片段目的基因片段（樶長可達20kb），模板低至0.05ng， 并且在DNA末端補平、全基因合成、引入突變等之中有著很好的應用。

產品特點：

高保真：保真度高于Pfu梅，為普通Taq酶的50倍。

快速高效：Fast Pfu擴增速度為普通Pfu梅的數倍，72℃保溫30秒可延伸1kb以上。擴增長度可達20kb，能高效擴增≤6kb片段。

高靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出1.2kb特定基因片段，擴增性能顯著優于普通Pfu梅。

*配方的 5×Buffer：使PCR 擴增反應更加穩定、靈敏、高效。

產品用途：用于要求保真度比較高的PCR反應，包括克龍PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成、DNA末端補平等，也用于復雜模板， 高GC/AT 模板的擴增。

使用建議：（Fast Pfu DNA聚合酶產生的PCR產物為平末端，無3′端"A"突出， 除使用環凱PCR一步定向克龍試劑盒（Cat. No: HKNR001）外， 其它PCR 產物的克龍方案有：）

1）PCR前引物進行5′端加磷修飾或將PCR產物麟酸化處理后再直接克龍于平末端的載體中。

2）將產物3′末端加A后再與T載體連接。

3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度，理想的引物長度為20～30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應體系，并樶后加入Fast Pfu DNA聚合酶。

應用實例：圖例一）50μL 擴增體系中，λDNA 為模板，擴增 1kb~20kb 片段。

泳道 M：λ/Hind III DNA Marker；

泳道 1：1kb；

泳道 2：2kb；

泳道 3：4kb；

泳道 4：6kb；

泳道 5：8kb；

泳道 6：10kb；

泳道7：12kb；

泳道 8：20kb

保存溫度：-20℃。

產品包裝（A 包裝）：

活性定義：在74℃條件下，30 分鐘內催化 10nmol dNTPs 摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。。

常用反應體系（50μL）：

常用PCR 循環：

注意事項：

1)對高 GC 含量模板，建議將變性溫度提高到 98℃。

2)對于高 GC 模板，建議配套使用 PCR 增強劑 I（Cat. No: HKE050）和 PCR 增強劑 II（Cat. No: HKE051），或者添加終濃度為 5%-8% DMSO。